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紫外-可見(UV-Vis)分光光度計(jì)通過測量紫外和可見光波段的光吸收對樣品進(jìn)行定量和鑒定。分光光度計(jì)的歷史前身可以追溯到1814年,當(dāng)時約瑟夫·馮·弗勞恩霍夫(Joseph von Fraunhofer)(弗勞恩霍夫應(yīng)用研究促進(jìn)協(xié)會的贊助人)利用自己發(fā)明的分光光度計(jì)測量太陽光并發(fā)現(xiàn)太陽光譜中的574條暗譜線(弗勞恩霍夫線)。
而一臺商用紫外-可見分光光度計(jì)是阿諾德·貝克曼在1941年推出的,該儀器利用石英棱鏡將鎢燈發(fā)出的光分離為吸收光譜,并利用光電管(光電二極管的前身)記錄信號。為了說明光源和電子設(shè)備的背景影響,紫外-可見分光光度計(jì)測量通過樣品的光的強(qiáng)度,并自動減去背景,以提供代表樣品測定特性的精確讀數(shù)。
分光光度計(jì)發(fā)展到今天,已成為生命科學(xué)、醫(yī)藥科學(xué)、分析化學(xué)等領(lǐng)域重要的儀器。而超微量分光光度計(jì)的出現(xiàn),讓分析所需的樣品量降低至微升級別,特別適合于生命科學(xué)珍貴樣品的的定量分析。Implen于2005年推出的Label Guard超微量比色皿,使任何用戶都可以在常規(guī)紫外分光光度計(jì)上進(jìn)行微量樣品測量,而2006上市的Nanophotometer?系列超微量分光光度計(jì),標(biāo)志了“后分光“時代的開始。
微量紫外-可見分光光度計(jì)與常規(guī)的分光光度計(jì)相比,有著不同的設(shè)備結(jié)構(gòu),其特性是能夠于獲得全光譜分析結(jié)果,使得核酸、蛋白質(zhì)等樣品可被定量及分析。常規(guī)分光光度計(jì)常采用前置分光器(如光柵),使光源發(fā)出的復(fù)色光分光為單色光,這能夠讓入射光保持很好的單色性,單色光穿過樣品池產(chǎn)生吸收,由二極管或倍增管檢測器檢測光強(qiáng)度。當(dāng)光柵進(jìn)行轉(zhuǎn)動時,就會有不同波長的單色光逐一通過樣品池,這時就可進(jìn)行光譜掃描測量。
雖然在靈敏度、噪音、雜散光等方面具備優(yōu)勢,但光譜掃描所需的時間往往是較長的,這并不太適合于生命科學(xué)樣品的定量及光譜分析。因此,目前市面上大多數(shù)的用于測量生命科學(xué)樣品的微量分光光度計(jì)采用的是相反的光學(xué)結(jié)構(gòu),即“后分光”形式。
由氙燈光源發(fā)出的復(fù)色光,通過樣品(微量或比色皿樣品),在相應(yīng)的波長下分別產(chǎn)生吸收,減弱的復(fù)色出射光通過分光器進(jìn)行分光,后由陣列式檢測器同時檢測所有波長對應(yīng)的吸光值。陣列式檢測器通常為CCD,為長條形結(jié)構(gòu),每個像元組能夠精確的檢測對應(yīng)的波長。因此,嚴(yán)謹(jǐn)?shù)恼f,微量分光光度計(jì)的全光譜測量,是無需“掃描“的”,而是同時獲得的。
因此,微量分光光度計(jì)的核心部件中,氙燈替代了鎢燈氘燈組,后分光結(jié)構(gòu)替代了前分光結(jié)構(gòu),陣列式CCD檢測器替代了光電二極管檢測器。在同時,也完全能夠滿足樣品測量準(zhǔn)確性的要求,可謂是為大分子定量分析量身定制的儀器。而Nanophotometer?出眾的全光譜測量性能,也廣泛應(yīng)用于分析化學(xué)領(lǐng)域。
后分光的結(jié)構(gòu)還有其優(yōu)勢,由于分光器是固定的,無需轉(zhuǎn)動進(jìn)行光譜掃描,因此波長的穩(wěn)定性是非常好的。而掃描式分光光度計(jì)必須考慮分光器轉(zhuǎn)動導(dǎo)致的波長漂移問題,需要定期檢測或調(diào)整。在后面幾期我們將介紹儀器的檢定問題,會具體介紹。
無論是前分光,還是后分光,都各具特點(diǎn),也適合于不同的應(yīng)用需求。充分的了解構(gòu)造和原理,有助于您合理的選擇和正確的使用儀器。德國Implen 18年來一直專注于微量樣品吸光度測量領(lǐng)域,我們以豐富的制造和應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)為用戶提供有效的產(chǎn)品,也熱衷于分享知識與傳遞價值。Implen是值得您信賴的超微量品牌。